{"id":7506,"date":"2022-03-01T20:32:52","date_gmt":"2022-03-01T20:32:52","guid":{"rendered":"https:\/\/factor-h.org\/?p=7506"},"modified":"2022-06-26T18:47:52","modified_gmt":"2022-06-26T18:47:52","slug":"session-i-of-chdis-therapeutic-conference-seminars-by-gill-bates-judith-frydman","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/factor-h.org\/pt\/session-i-of-chdis-therapeutic-conference-seminars-by-gill-bates-judith-frydman","title":{"rendered":"Sess\u00e3o I da CHDI terap\u00eautico de confer\u00eancia: organiza\u00e7\u00e3o de Semin\u00e1rios por Gill Bates & Judith Frydman"},"content":{"rendered":"

Gill Bates da University College London,<\/strong> descreveu seu trabalho no splicing incompleto do gene Htt e as implica\u00e7\u00f5es dessas descobertas para o desenvolvimento terap\u00eautico. O produto de splicing que ela identificou levou \u00e0 produ\u00e7\u00e3o de uma prote\u00edna exon-1 pura, que no contexto da expans\u00e3o CAG \u00e9 muito t\u00f3xica. Seu trabalho recente se concentrou em determinar, no contexto de modelos de camundongos knock-in, se esse produto anormal emendado (que s\u00f3 ocorre em fun\u00e7\u00e3o da expans\u00e3o) contribui significativamente para o in\u00edcio e a progress\u00e3o da doen\u00e7a nos modelos de roedores comumente usados ( e por extens\u00e3o, \u00e0 doen\u00e7a humana). \u00c9 bem conhecido que o exon-1 \u00e9 muito propenso \u00e0 agrega\u00e7\u00e3o e, portanto, isso pode iniciar a patologia da doen\u00e7a encontrada na DH humana e em modelos de camundongos.<\/p>\n\n\n\n

Existem algumas evid\u00eancias de que esse processamento anormal pode ocorrer em amostras humanas, mas as evid\u00eancias atuais s\u00e3o mais fortes para os casos pedi\u00e1tricos de HD, onde o comprimento do CAG \u00e9 maior. Isso tamb\u00e9m foi demonstrado em fibroblastos de pacientes e por no local<\/em> estudos de hibridiza\u00e7\u00e3o (ISH) em n\u00facleos humanos, onde seu laborat\u00f3rio pode detectar a express\u00e3o desse produto de mRNA. em todos os modelos de camundongos, ela pode detectar a prote\u00edna exon-1 pura pelo uso de combina\u00e7\u00f5es de anticorpos que detectam especificamente a prote\u00edna exon-1 (o anticorpo MW8 \u00e9 capaz de reconhecer apenas uma sequ\u00eancia de prote\u00edna exon-1 pura que termina em um res\u00edduo de prolina, e n\u00e3o no contexto da prote\u00edna gerada a partir do transcrito de mRNA de comprimento total; portanto, MW8 \u00e9 considerado um anticorpo de liga\u00e7\u00e3o de 'neo-ep\u00edtopo').<\/p>\n\n\n\n

Gill descreve v\u00e1rios novos ensaios baseados em anticorpos HTT mutantes para rastrear a progress\u00e3o da patologia agregada em modelos de camundongos KI, incluindo o monitoramento da agrega\u00e7\u00e3o do exon-1. A agrega\u00e7\u00e3o do produto exon-1 n\u00e3o parece alterar os n\u00edveis completos de HTT usando ensaios padr\u00e3o. Usando esses ensaios, seu laborat\u00f3rio agora conseguiu mostrar que, em um modelo de camundongo, uma sequ\u00eancia de DNA de 20 kb no \u00edntron-1 \u00e9 exclu\u00edda por meio da edi\u00e7\u00e3o crispr de um modelo KI, o camundongo HdhQ150. Neste camundongo, o produto de prote\u00edna pura do exon-1 produzido por extravio \u00e9 reduzido em 80-90%, sem alterar os n\u00edveis da prote\u00edna HTT de comprimento total. \u00c9 importante ressaltar que a patologia agregada \u00e9 muito diminu\u00edda (aparece, mas muito atrasada; 3 vs 17 meses de idade em qualquer modelo) quando o evento de plicing incorreto \u00e9 prevenido geneticamente. Endpoints adicionais, como RNAseq e estudos de \u00e9foros SPN estriatais, est\u00e3o em andamento, mas ainda n\u00e3o foram conclu\u00eddos.<\/p>\n\n\n\n

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Gill Bates falando na confer\u00eancia terap\u00eautica da CHDI Foundation<\/figcaption><\/figure>\n\n\n\n

Ela ent\u00e3o passou a monitorar a agrega\u00e7\u00e3o conduzida pelo exon-1 puro no modelo de camundongo YAC128 humanizado e descobriu que a agrega\u00e7\u00e3o mais precoce e profunda \u00e9 encontrada no cerebelo a partir dos 3 meses de idade. Ela ent\u00e3o passou a usar ISH para detectar o transcrito HTT completo versus o mRNA mal colocado do exon1a, e descobriu que eles formavam 'inclus\u00f5es' ou 'focos' dentro do n\u00facleo de neur\u00f4nios que podem ser patog\u00eanicos, j\u00e1 que n\u00e3o cont\u00eam HTT normal de camundongo. Esses 'focos' parecem ocorrer apenas em um contexto humano, n\u00e3o nos modelos de camundongos KI, sugerindo que as sequ\u00eancias do \u00edntron-1 humano s\u00e3o provavelmente respons\u00e1veis pela reten\u00e7\u00e3o desse mRNA no n\u00facleo. Ela concluiu sua palestra resumindo sua hip\u00f3tese para o mecanismo de patog\u00eanese devido a misplicing ou prote\u00f3lise.<\/p>\n\n\n\n

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Judith Frydman da Universidade de Stanford<\/strong> falou sobre outro aspecto da biologia do HTT envolvendo o controle translacional dos n\u00edveis de prote\u00edna HTT e o papel do mHTT na resposta ao estresse nas c\u00e9lulas cerebrais. Judith aqui defende um novo mecanismo que pode contribuir para a patog\u00eanese da doen\u00e7a, que pode explicar por que na DH h\u00e1 tantas coisas erradas com as c\u00e9lulas cerebrais. Ela est\u00e1 se concentrando no papel das altera\u00e7\u00f5es riboss\u00f4micas na DH e no papel do HTT na biologia ribossomal. Os n\u00edveis e o destino das prote\u00ednas s\u00e3o determinados pela taxa de alongamento do ribossomo. O exon-1 do HTT cont\u00e9m as repeti\u00e7\u00f5es de poliprolina, que atuam como sequ\u00eancias de paralisa\u00e7\u00e3o da tradu\u00e7\u00e3o e s\u00e3o muito dif\u00edceis de traduzir, retardando a tradu\u00e7\u00e3o. Al\u00e9m disso, o HTT possui um quadro de leitura micro-aberto (uORF) no 5' UTR do gene HTT, que \u00e9 conservado em mam\u00edferos. uORFs regulam a tradu\u00e7\u00e3o e s\u00e3o tipicamente implicados na regula\u00e7\u00e3o g\u00eanica pela resposta celular ao estresse. Judith afirma que o HTT \u00e9 um gene de \u201cresposta ao estresse\u201d. Ela mostra que o eIF2a-P \u00e9 um evento que regula a tradu\u00e7\u00e3o HTT em resposta a muitas pistas potenciais, inclusive nos dendritos e terminais ax\u00f4nicos.<\/p>\n\n\n\n

Usando uma t\u00e9cnica chamada 'perfil de ribossomo', ela mostra que tanto o uORF quanto o ORF principal (codificando HTT) s\u00e3o ligados por ribossomos de tradu\u00e7\u00e3o, e a extens\u00e3o da ocupa\u00e7\u00e3o por ribossomos pode ser modulada por sinais de estresse. A express\u00e3o do HTT \u00e9 induzida pelo estresse em v\u00e1rios contextos celulares, incluindo neur\u00f4nios prim\u00e1rios. O estresse ignora o uORF e desloca a tradu\u00e7\u00e3o para o ORF principal.<\/p>\n\n\n\n

Judith ent\u00e3o postulou que esse processo - a regula\u00e7\u00e3o positiva de HTT via uORF e estresse - poderia ser determinante dos n\u00edveis de prote\u00edna e do processo de agrega\u00e7\u00e3o. Portanto, o uORF controla os n\u00edveis de prote\u00edna HTT sendo produzidos.<\/p>\n\n\n\n

Em um contexto de HD, as colis\u00f5es s\u00e3o observadas de maneira dependente do comprimento do CAG, usando um sistema artificial, onde a express\u00e3o viral de construtos HTT expressando o exon-1. Usando puromicina, que induz parada translacional, ela estuda o impacto da repeti\u00e7\u00e3o CAG nas colis\u00f5es. As colis\u00f5es podem ser reconhecidas por um controle de qualidade do ribossomo (RQC) e ativam diversas vias de sinaliza\u00e7\u00e3o, como resposta a esse evento, sinalizando que a c\u00e9lula est\u00e1 com um grande problema. Seu laborat\u00f3rio ent\u00e3o conduziu estudos prote\u00f4micos usando o sistema de polissomas virais expressando o exon-1, e eles mostraram que muitas E3 ligases s\u00e3o encontradas alteradas neste sistema devido \u00e0 paralisa\u00e7\u00e3o do mHTT, incluindo a deple\u00e7\u00e3o de eIF5a, levando ao t\u00e9rmino prematuro da tradu\u00e7\u00e3o.<\/p>\n\n\n\n

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Judith Frydman falando na confer\u00eancia terap\u00eautica da CHDI Foundation<\/figcaption><\/figure>\n\n\n\n

Os n\u00edveis de eIF5a diminuem nos c\u00e9rebros de modelos de ratinhos com DH, e isto \u00e9 suportado pelos n\u00edveis de ubiquitina\u00e7\u00e3o da subunidade do ribossoma, que indicam um d\u00e9fice da fun\u00e7\u00e3o do ribossoma. Al\u00e9m disso, os mecanismos proteost\u00e1ticos s\u00e3o afetados no in\u00edcio do processo da doen\u00e7a. Judith afirma que a perda da express\u00e3o do eIF5a \u00e9 cr\u00edtica para a patologia na DH, por meio de um mecanismo de tradu\u00e7\u00e3o. Ela acha que essa \u00e9 uma abordagem terap\u00eautica v\u00e1lida, por meio da modula\u00e7\u00e3o do alongamento translacional.<\/p>","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

Gill Bates from University College London, described her work on incomplete splicing of the Htt gene, and the implications of these findings for therapeutic development. The splicing product she identified led to the production of a pure exon-1 protein, which in the context of the CAG expansion, is very toxic. Her recent work has been […]<\/p>\n","protected":false},"author":3,"featured_media":7496,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"_monsterinsights_skip_tracking":false,"_monsterinsights_sitenote_active":false,"_monsterinsights_sitenote_note":"","_monsterinsights_sitenote_category":0,"footnotes":""},"categories":[9,29],"tags":[188,189,191,190],"class_list":["post-7506","post","type-post","status-publish","format-standard","has-post-thumbnail","hentry","category-general-news","category-research","tag-chdi-foundation","tag-gill-bates","tag-hdtc2022","tag-judith-frydman"],"aioseo_notices":[],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/factor-h.org\/pt\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/7506","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/factor-h.org\/pt\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/factor-h.org\/pt\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/factor-h.org\/pt\/wp-json\/wp\/v2\/users\/3"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/factor-h.org\/pt\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=7506"}],"version-history":[{"count":0,"href":"https:\/\/factor-h.org\/pt\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/7506\/revisions"}],"wp:featuredmedia":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/factor-h.org\/pt\/wp-json\/wp\/v2\/media\/7496"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/factor-h.org\/pt\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=7506"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/factor-h.org\/pt\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=7506"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/factor-h.org\/pt\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=7506"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}