{"id":7546,"date":"2022-03-02T00:27:12","date_gmt":"2022-03-02T00:27:12","guid":{"rendered":"https:\/\/factor-h.org\/?p=7546"},"modified":"2022-06-26T18:46:51","modified_gmt":"2022-06-26T18:46:51","slug":"chdis-conference-session-ii-seminars-by-drs-jose-lucas-and-michael-rape","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/factor-h.org\/pt\/chdis-conference-session-ii-seminars-by-drs-jose-lucas-and-michael-rape","title":{"rendered":"Confer\u00eancia do CHDI (Sess\u00e3o II) \u2013 Semin\u00e1rios dos Drs. Jos\u00e9 Lucas e Michael Rape"},"content":{"rendered":"

Dr. Jos\u00e9 Lucas do Centro de Biologia Molecular Severo Ochoa de Madrid<\/strong> falou sobre este trabalho recente sobre o papel do mHTT no splicing alterado e adenila\u00e7\u00e3o de mRNAs na DH. O Jos\u00e9 come\u00e7ou por descrever o seu trabalho pioneiro em altera\u00e7\u00f5es de splicing da tau no c\u00e9rebro da DH. Ele tamb\u00e9m descreveu altera\u00e7\u00f5es de splicing na prote\u00edna TAF1, que leva \u00e0 degenera\u00e7\u00e3o estriatal e discinesias em um dist\u00farbio gen\u00e9tico raro. Ele postula que o mHTT leva a mudan\u00e7as no SRSF6 com m\u00faltiplos efeitos, um para modular o splicing de Tau e, segundo e, para uma perda de fun\u00e7\u00e3o de TAF1. Devido a essas observa\u00e7\u00f5es independentes, seu laborat\u00f3rio buscou uma an\u00e1lise imparcial mais profunda de prote\u00ednas de liga\u00e7\u00e3o ao RNA e eventos globais de misplicing que ocorrem na DH. Ele identificou 342 genes incorretos em amostras humanas e de roedores, incluindo v\u00e1rios genes conhecidos por levar \u00e0 degenera\u00e7\u00e3o quando mutados. Ele ent\u00e3o se concentrou em fatores de splicing alterados que poderiam explicar os fen\u00f3tipos observados, como TIA1, hNRPC, U2AF2 e RBFOX, sendo este \u00faltimo um fator chave que \u00e9 regulado negativamente na DH. Eles criaram um camundongo transg\u00eanico superexpressando RBFOX1 e os cruzaram com o modelo de camundongo R6\/1, levando a uma atenua\u00e7\u00e3o da doen\u00e7a. Ele se referiu ao trabalho feito em 2011 pela Dra. Nancy Bonini e focou em um conjunto de genes conhecidos por moderar a toxicidade do RNA em moscas, incluindo o musclebound e o orb2 (CPEB4 \u00e9 o ort\u00f3logo dos mam\u00edferos), um gene que regula a poliadenila\u00e7\u00e3o. O CPEB tamb\u00e9m fornece regula\u00e7\u00e3o da tradu\u00e7\u00e3o nas sinapses de maneira temporal. Jose ent\u00e3o mostrou que CPEB1 e -4 est\u00e3o alterados na DH, e determinou que 20% dos transcritos apresentam altera\u00e7\u00f5es na adenila\u00e7\u00e3o, incluindo SLC19A3, um transportador de tiamina no endot\u00e9lio cerebral. Defici\u00eancias em SLC19A3 podem ser restauradas pela administra\u00e7\u00e3o de biotina, presumivelmente por meio de um efeito nos n\u00edveis de SLC19A3. Portanto, se sua hip\u00f3tese estiver correta, ent\u00e3o os pacientes em HD deveriam ter menos concentra\u00e7\u00e3o de tiamina no LCR e no par\u00eanquima cerebral. Um conjunto final de estudos mostrou que a terapia de suplementa\u00e7\u00e3o de tiamina e biotina pode restaurar mudan\u00e7as comportamentais em modelos R6\/2 e Q175. Uma patente foi registrada e um pequeno estudo cl\u00ednico foi planejado (chamado estudo HUNTIAM) para avaliar a seguran\u00e7a dessa estrat\u00e9gia de suplementa\u00e7\u00e3o e as doses que funcionam em camundongos s\u00e3o muito altas e mostraram alguma toxicidade nos estudos com roedores. Trabalho adicional para estender os n\u00edveis diminu\u00eddos de tiamina no LCR est\u00e1 sendo explorado em um estudo longitudinal com o hospital Sant Pau em Barcelona.<\/p>\n\n\n\n

Dr. MICHAEL RAPE<\/h2>\n\n\n\n

Dr. Michael Rape da Berkeley University e do Howard Hughes Medical Institute<\/strong> falou sobre os mecanismos que degradam a prote\u00edna HTT via proteassoma, uma etapa cr\u00edtica na regula\u00e7\u00e3o do n\u00edvel de express\u00e3o da prote\u00edna e uma \u00e1rea importante para o desenvolvimento terap\u00eautico. Os principais desafios para esta \u00e1rea t\u00eam sido a identifica\u00e7\u00e3o de complexos ubiquitina-ligase que podem modificar o HTT e direcion\u00e1-lo para degrada\u00e7\u00e3o, e os res\u00edduos de amino\u00e1cidos lisina espec\u00edficos que s\u00e3o modificados e regulam sua meia-vida. Ele ent\u00e3o descreve o recente trabalho n\u00e3o publicado que o levou a identificar a ligase E3 que trabalha para modificar o HTT diretamente e degrad\u00e1-lo. Sua equipe reconstituiu a ubiquitina\u00e7\u00e3o do HTT in vitro, abrindo caminho para a identifica\u00e7\u00e3o de s\u00edtios modificados do HTT e de um sistema de triagem para identificar colas moleculares \u2013 pequenas mol\u00e9culas que promovem a intera\u00e7\u00e3o entre o HTT e a E3 ligase identificada.<\/p>\n\n\n\n

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Michael Rape falando sobre a degrada\u00e7\u00e3o direcionada do HTT<\/figcaption><\/figure>\n\n\n\n

Ele afirma que os sinais de degrada\u00e7\u00e3o para HTT est\u00e3o na regi\u00e3o ap\u00f3s o primeiro dom\u00ednio HEAT de HTT. Usando uma fus\u00e3o GFP com 508 AA N-terminal HTT e realizando uma triagem em c\u00e9lulas de neuroblastoma transfectadas de forma est\u00e1vel para identificar fatores que promoveriam a agrega\u00e7\u00e3o desse fragmento (que normalmente n\u00e3o agrega). Usando v\u00e1rios sinais de estresse, os agregados aparecem nessas c\u00e9lulas e, ap\u00f3s a remo\u00e7\u00e3o dos estressores, os agregados ('focos') s\u00e3o eliminados. A exposi\u00e7\u00e3o prolongada ao estresse leva a uma agrega\u00e7\u00e3o dependente do comprimento do CAG, mesmo ap\u00f3s longos per\u00edodos de washout. Isso permitiu uma triagem gen\u00f4mica de E3 ligase e efetores que levou \u00e0 identifica\u00e7\u00e3o dos complexos que podem afetar esse processo, retardando a elimina\u00e7\u00e3o de HTT, RNF126b e UBE2K. RNF126 se liga diretamente ao HTT e \u00e0 desagregase p97\/VCP. Tamb\u00e9m \u00e9 altamente expresso no c\u00e9rebro. Al\u00e9m disso, o laborat\u00f3rio de Rape mostrou que um ensaio de degrada\u00e7\u00e3o pode ser desenvolvido para mostrar a atividade direta dos complexos RNF126 no HTT nas c\u00e9lulas. RNF126 KO aumentou a agrega\u00e7\u00e3o de HTT, e a superexpress\u00e3o pode degrad\u00e1-la em um contexto celular. Al\u00e9m disso, um sistema de ubiquitina\u00e7\u00e3o reconstitu\u00eddo foi obtido com RNF126 e HTT purificados. Os mutantes pontuais que inativaram a atividade catal\u00edtica do RNF12 n\u00e3o apresentaram tal atividade. As enzimas E2 s\u00e3o UBE2K e UBE2D3. Ele tamb\u00e9m mostrou que este sistema tamb\u00e9m funciona para ubiquitina\u00e7\u00e3o HTT de comprimento total, n\u00e3o apenas no sistema de rep\u00f3rter mais curto.<\/p>\n\n\n\n

Seu trabalho sugere que existe um sistema para controlar a agrega\u00e7\u00e3o de HTT e, portanto, abrir caminho para a identifica\u00e7\u00e3o de pequenas mol\u00e9culas que podem direcionar o HTT para degrada\u00e7\u00e3o.<\/p>\n\n\n\n

\"\"<\/figure>\n\n\n\n

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Dr. Jos\u00e9 Lucas from the Center for Molecular Biology Severo Ochoa in Madrid spoke about this recent work in the role of mHTT in altered splicing and adenylation of mRNAs in HD. Jose started by describing his pioneering work in tau splicing alterations in the HD brain. He also described splicing changes in TAF1 protein, […]<\/p>\n","protected":false},"author":3,"featured_media":7496,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"_monsterinsights_skip_tracking":false,"_monsterinsights_sitenote_active":false,"_monsterinsights_sitenote_note":"","_monsterinsights_sitenote_category":0,"footnotes":""},"categories":[9,29],"tags":[188,191,197,196],"class_list":["post-7546","post","type-post","status-publish","format-standard","has-post-thumbnail","hentry","category-general-news","category-research","tag-chdi-foundation","tag-hdtc2022","tag-jose-lucas","tag-michael-rape"],"aioseo_notices":[],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/factor-h.org\/pt\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/7546","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/factor-h.org\/pt\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/factor-h.org\/pt\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/factor-h.org\/pt\/wp-json\/wp\/v2\/users\/3"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/factor-h.org\/pt\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=7546"}],"version-history":[{"count":0,"href":"https:\/\/factor-h.org\/pt\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/7546\/revisions"}],"wp:featuredmedia":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/factor-h.org\/pt\/wp-json\/wp\/v2\/media\/7496"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/factor-h.org\/pt\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=7546"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/factor-h.org\/pt\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=7546"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/factor-h.org\/pt\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=7546"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}