El Dr. Gene Yeo del UCSD habló sobre su trabajo reciente sobre la degradación del ARN como objetivo utilizando Crispr-Cas13d. Su laboratorio se centró en las proteínas de unión al ARN (RBP) como reguladores de la expresión génica y como dianas farmacológicas. Ha desarrollado métodos para estudiar sistemáticamente las funciones de las prácticas comerciales restrictivas, como el método eCLIP mejorado, que su laboratorio ha realizado para caracterizar >200 prácticas comerciales restrictivas. También ha desarrollado métodos para rastrear el ARN utilizando imágenes en vivo en células individuales. Sus métodos se han utilizado para apuntar a los ARN de expansión repetidos utilizando la tecnología Crispr-Cas. Recientemente, se centró en el uso de la enzima Cas13d para degradar ARN específicos, incluido el HTT, dirigiéndose a la repetición CAG. El sistema Cas13d/cripsr puede adaptarse a los AAV y, por lo tanto, puede usarse para estudios in vivo sin tener que usar un sistema de vector dual. Demostró que este sistema puede degradar el ARN de HTT y corregir algunas de las alteraciones moleculares encontradas en HD iPSC, en una colaboración entre su laboratorio y el laboratorio de la Dra. Leslie Thompson.
Gen pasó a describir de que su sistema tiene menos fuera de objetivo efectos sobre otros CAG-contiene repita los genes. Roedores experimentos con AAV-Cas13d/CAGex en Q175s pueden paliar los efectos del comportamiento en este modelo, la disminución de la HTT agregado de la patología, y también restaurar el volumen del estriado. El efecto sobre la Q175s parecía ser alelo específico, ya que no hay cambios en el tipo salvaje ratón HTT fueron detectados por Western blot, sin evidencia de inflamación o destinatarios de los efectos. Su laboratorio se centra ahora en otros humanos de las prácticas comerciales Restrictivas de mejorar la terapéutica de desarrollo. Adicionales importantes en el análisis se carece, en mi opinión, en términos de la especificidad de este enfoque y su aplicabilidad para el desarrollo terapéutico, pero este enfoque es significativo ya que los objetivos de la ARN en lugar de ADN utilizando crispr (por lo tanto no permanentemente la edición del genoma, incluyendo involuntaria lugares del genoma), permitiendo a los potenciales alelo-específicos de la orientación que podría ser mejor tolerado.
El Dr. Irina Antonijevic de la terna de la Terapéutica describe su trabajo en el desarrollo de una terapéutica de oligonucleótidos antisentido (ASO), la orientación de la gen Msh3, un gen crítico que controla somáticas de expansión de la HTT número de repeticiones de CAG en el cerebro, como se identifica por la AGA (asociación amplia del genoma) de los estudios. Inicialmente, Msh3 fue demostrado para regular la inestabilidad somática de la HTT gen en los ratones y los humanos estudios de asociación genética compatible la conservación de Msh3 función en el control de la tasa de expansión de la repetición de CAG y la edad de inicio del motor de diagnóstico en HD de los individuos.
El ESCUDO-HD el estudio es un estudio de la historia natural llevado a cabo por el Triplete que ha inscrito a 70 personas en 9 sitios en 5 países (estados UNIDOS, Canadá, Francia, Alemania y reino unido). El estudio tendrá una duración de 2 años y apoyo a la prevista de la Fase 1/2a estudio con la ASO. Irina se describen los datos iniciales sobre la resonancia magnética estructural de los cambios en el volumen del caudado y del volumen ventricular durante el estudio longitudinal a lo largo de un período de 48 semanas, lo que sugiere que la imagen puede ser adecuado como un biomarcador de extremo de pista. El PIN HD mediciones incluye un compuesto del total de la puntuación motora, SDMT (solo dígito modalidad de prueba), y evaluador de las puntuaciones, y también mostró cambios durante el período monitoreado hasta el momento. También son la medición de los niveles de LCR de la NFL (neurofilamentos la luz de la cadena), pero ella no informe de resultados.
Luego, Irina describió el trabajo reciente en NHP, el trabajo realizado para avanzar en TTX-3360, el candidato clínico ASO. El grado de supresión de Msh3 después de la administración de ICV es grande y sostenido durante un período de 24 semanas (la supresión de >50% es el objetivo de Msh3, según el trabajo en roedores que sugiere que este nivel de supresión debería modular el SI de la repetición HTT CAG). Finalmente, describieron el trabajo de biomarcadores realizado en TTX-3360 usando mediciones en LCR de ARNm de Msh3 contenido dentro de exosomas (vesículas extracelulares) derivados del cerebro. Las muestras de LCR de SHIELD-HD fueron esenciales para el desarrollo de ensayos para detectar los niveles de Msh3 y los cambios después de la administración de ASO. La plataforma final incluía análisis de qPCR para la detección de ARNm en LCR de humanos y primates. Los genes de control de limpieza incluyen HKG, ActB y EEF2 para la normalización de los cambios en el LCR después de los tratamientos. El uso de estos genes de control se corroboró con las muestras de líquido cefalorraquídeo del estudio SHIELD-HD, lo que garantiza que no haya cambios en las personas no tratadas con el tiempo. En los estudios de NHP, la recolección de LCR en cisterna magna fue mejor para la detección de Msh3 que las recolectas a través de la recolección intratecal (lumbar) de LCR. Esto está pendiente de confirmación en estudios de recolección humana. También midieron la expresión de Msh3 sana y HD en vesículas de LCR, que no cambió con la enfermedad (pero el tamaño de la muestra era pequeño). Hay una variabilidad de 2/3 veces en la expresión entre los individuos medidos. Aún no se han analizado datos longitudinales, aunque esta es un área crítica de trabajo.
Por cierto, que informan de que la distribución del tamaño de las vesículas extracelulares aislado de CSF cambio en el curso de la enfermedad – así que este es un aspecto que desea proseguir. Los datos No se presentaron en vivo, que la dosificación de la ASO cambios Msh3 niveles en LCR de EVs que se correlacionan con el parénquima la reducción de la meta. Este es el estudio crítico que está pendiente.
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